植物激素对附子多糖含量的影响 singificant

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二、植物激素对附子多糖含量的影响

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二、植物激素对附子多糖含量的影响

植物激素对附子多糖含量的影响

植物在生长过程中受到内源激素(或外源激素)的调控，因此在植物栽培过程中，激素可能对其生长发育、生理生化、产量、品质、次生代谢产物等产生影响。

【摘要】目的研究植物激素对附子多糖含量的影响。方法在附子幼苗期和膨大期喷施不同激素，用蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量。结果不同激素间存在明显差异，赤霉素(GA)和-萘乙酸(NAA)也有助于多糖含量的增加。6-苄氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)也有助于多糖含量的增加。吲哚乙酸(IAA)具有抑制作用。结论植物激素对附子多糖含量有显著影响。

【关键词】植物激素；乌头；多糖

乌头。是中国常用的中药。附子的主要有效成分。乌头。是乌头碱类生物碱，如乌头碱、新乌头碱和次乌头碱。具有抗炎、镇痛、强心、抗心律失常、降血糖等药理作用。

中草药多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗肝炎、抗溃疡、调节血脂、降血糖和抗衰老等作用[3]。附子多糖提取物还具有抗癌、抗衰老、增强免疫功能的作用[4]。乌头多糖高效低毒的生物学特性近年来逐渐引起人们的关注，是新药研发方向之一。植物激素作为一种化学防治技术，在农业上发挥了重要作用，也影响了药用植物的次生代谢产物，但对乌头的研究尚未开展。

因此，研究激素对乌头多糖含量的影响，对于乌头的栽培管理、标准化生产和药用价值的利用具有重要意义。

1材料和仪器

1.1材料实验材料来自四川江油乌头的主要栽培种，经侯大斌教授鉴定。随机区组设计，重复3次，种植于西南科技大学试验田。试验田土壤特性：全氮含量0.14%，速效氮含量111.50 mg/kg，速效磷含量32.785 mg/kg，速效钾含量89.29 mg/kg，有机质含量5.19 mg/kg。基肥：农家肥30 000公斤/公顷，油饼30 00公斤/公顷，高效磷肥750公斤/公顷，按照附子生产要求进行田间管理，每月除草一次。

激素选择：GA(60 mg/L)、6-BA(40 mg/L)、NAA (30 mg/L)、IAA(20 mg/L)、KT (25 mg/L)、对照(清水)，分别在苗期和根下膨大期喷施，6月27日采收。

将收获的附子用自来水洗净，用蒸馏水漂洗两次，装入牛皮纸袋，放入烘箱，105烘干30 min，然后在60 ~ 70烘干至恒重，粉碎过60目筛，4冰箱保存备用。

1.2仪器设备、试剂旋转蒸发器(Buchi公司)、BP211D电子分析天平(Storis公司)、T6万能新世纪紫外分光光度计(北京普西公司)、高速冷冻离心机(拜克曼公司)、中药切片机(长沙中南制药机械厂)、中草药粉碎机(天津测试仪器有限公司)。无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇、浓硫酸、蒽酮、葡萄糖等。都是分析纯。2种方法

2.1附子多糖的提取[5，6]称取附子干燥粉200 g，加80%乙醇适量，回流提取3 h，过滤，滤渣蒸去乙醇，用沸水提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩至200 ml，加95%乙醇使含醇量达80%，用乙醇在4冰箱中沉淀过夜，离心(1)。将粗多糖用热水溶解于水中，用Sevage法(氯仿正丁醇=51)除去蛋白质，重复3次(直到考马斯亮蓝法检测不到蛋白质为止)。

流水透析后，蒸发浓缩至200 ml，加入95%乙醇使含醇量达到80%，在4冰箱中过夜醇沉。离心，沉淀物依次用无水乙醇和丙酮洗涤，真空干燥，称重计算收率。

2.2多糖含量测定采用蒽酮-硫酸法[7]。以糖浓度(c，g /L)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程A=0.005 2X-0.002 7，r=0.999 2。葡萄糖在20100g/l范围内与吸光度呈良好的线性关系

2.3换算系数的测定准确称取乌头多糖100 mg，溶于1L容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。准确吸取1 ml于带塞试管中，根据蒽酮-硫酸法测定吸光度，根据回归方程计算多糖浓度中葡萄糖的浓度，根据下式计算换算系数f。f=C D/W .其中w是多糖的质量(mg)，C是葡萄糖的浓度( g/ml)，d是稀释倍数。测得的转换因子f=4.83 (n=5，RSD=2.67%)。

2.4样品溶液的制备准确称取1.0 g(n=3)不同处理的附子样品，加入150 ml 80%乙醇回流提取3 h，抽滤，残渣用100 ml水提取1 h，两次，离心，定容于250 ml容量瓶中，得样品溶液。

2.5精密度实验准确称取乌头粉5份，每份1 g，按“2.4”项下方法同时制备5份样品溶液。准确移取各样品溶液1 ml，置于塞住的试管中，按“2.2”项下的方法测定吸光度，计算乌头多糖的含量。相对标准偏差为1.83% (n=5)，表明该分析方法具有良好的精密度。

2.6稳定性试验按“2.4”项下样品溶液制备方法制备，将1 ml供试品溶液吸入带塞试管中，按“2.2”项下方法测定吸光度，每1小时1次，共6小时，考察其稳定性。测得的吸光度在6 h内无明显变化，稳定性好(RSD=1.70%)。2.7数据处理数据用SAS软件进行方差分析和最小显著差异法(LSD)分析。3个结果

3.1精制多糖的产率从200 g干燥的乌头粉末中获得10.82 g精制多糖，产率为5.41%(n=3)。3.2回收率的测定：准确称取5份附子样品各1.0 g，分别加入附子多糖约30 mg，按“2.4”项下的样品溶液制备和“2.2”项下的测定方法操作，测定吸光度，计算回收率(R)。回收率R=90.4%，RSD=1.58%(n=5)。实验结果见表1。

3.3植物激素对附子多糖含量的影响；准确吸取“2.5”项下的样品溶液1 ml于带塞试管中，根据蒽酮-硫酸法测定吸光度，根据回归方程计算样品溶液中的葡萄糖浓度，根据下式计算附子粉中多糖的含量。样品中的含量(%)=(CD /W Rf) 100%。其中：c为样品溶液中葡萄糖的浓度，d为稀释倍数，f为换算系数，w为样品质量，r为回收率。各处理样品中多糖含量及方差分析表见表2。表2差异分析表

激素对附子多糖含量的影响见表3。组间方差分析表明F=0.091F0.05，说明不同激素间存在明显差异，多糖对不同激素的敏感性不同。

赤霉素和NAA对多糖含量的提高最为显著，平均含量分别为37.00 mg/g和36.40 mg/g，分别比对照高10.68%和8.88%，赤霉素和NAA与其他激素和对照差异极显著。两种细胞分裂素对多糖含量的影响也显著增加，但低于GA和NAA，含量分别为35.02 mg/g和34.90 mg/g。增幅分别为4.76%和4.40%，与对照差异极显著。IAA对多糖含量有明显的抑制作用，多糖含量仅为32.13 mg/g.

几种激素的作用：赤霉素、萘乙酸、6-氨基丁酸。表3激素对附子多糖含量的影响

字母表示处理间差异显著水平，相同字母表示两个处理间无差异，不同字母表示两个处理间显著差异，大写字母表示极显著差异(1%)，小写字母表示显著差异(5%) 4讨论。

植物在生长过程中受到内源激素(或外源激素)的调节，因此激素可能对其生长、生理、生化、产量、品质、次生代谢产物等产生影响。多糖作为附子的有效成分之一，是评价附子药用价值的主要标准之一。

目前，测定多糖含量的方法主要是经典的紫外比色法。通过验证，该方法具有良好的精密度和稳定性，回收率也较高。这是检测多糖含量的最佳方法之一。通过实验可以发现，激素可以调节多糖的含量。除IAA外，其他几种激素均可明显提高多糖含量，说明IAA不稳定，与前人研究的IAA的调节作用相似[8]。

IAA在植物生长的不同阶段容易被吲哚乙酸氧化酶破坏，对植物生长发育产生影响，可能是抑制多糖含量的原因之一。由于目前激素对植物生长的调控机制尚不明确，激素对多糖含量的影响有待进一步研究。

【参考文献】【1】国家药典委员会。中国药典，第一部。北京化学工业出版社2005:28。[2]沈英俊。中药药理学[M]。北京：人民卫生出版社，2000 :382。[3]黄瑞松。中草药中多糖含量测定方法概述[J]刘京生，等.附子多糖阿霉素长循环热敏脂质体的抗肿瘤作用及机制[J].细胞与分子免疫学杂志，2006，22 (4): 458。

舒晓燕，刘辉，梁静，等.附子粗多糖提取工艺的研究[J].中草药，2006，29(12):1349。[6]杨凡，郝守国，徐恒贵，等.附子多糖含量的测定[J].大连医科大学学报，2007年第2版[M]。北京高等教育出版社1999 103。[8]张士诚，刘祖琪。植物化学调控原理与技术[M]。北京中国农业科学技术出版社1999:1。

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