荧光western blot应注意些什么 western blot一抗二抗

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一、Westernblot的一抗和二抗都可以用多克隆抗体吗

二、荧光western blot应注意些什么

多克隆抗体可用于

一、Westernblot的一抗和二抗都可以用多克隆抗体吗

Western blot的一抗和二抗。但由于多克隆抗体只有两种情况，特异性不如单克隆抗体，所以Western blot要求尽量使用单克隆抗体。确保实验结果的准确性和可靠性

二、荧光western blot应注意些什么

荧光蛋白印迹要注意：抗体浓度要优化，膜要在几种不同稀释度的抗体中孵育。选择信噪比最高的稀释。当从化学发光改为荧光检测时，应提高一抗浓度；通常是增加2-5倍。第二抗体的浓度可能也需要优化；1:5000稀释是一个很好的起点。使用特异性抗体时，可以参考厂家的建议。为了获得最高的信噪比，应该使用具有低自发荧光的膜。许多封闭溶液已成功用于荧光检测。

我们建议使用0.5-5%的酪蛋白，最多5%的脱脂奶粉，或者最多3%的BSA，溶解在TTBS中。缓冲液中的颗粒可能会停留在膜上，造成荧光错觉。仅使用高质量的试剂，并对所有缓冲液进行过滤和灭菌。使用钝镊子从边缘操作。避免撕裂或弄皱薄膜，这将在荧光检测中造成错觉。用铅笔在膜上做标记，因为很多墨水会发荧光。溴酚蓝会发荧光。

确保染料已从样品中分离出来，切掉含有染料的凝胶部分，或从样品缓冲液中省略溴酚蓝。不需要在黑暗中进行免疫检测；正常的室内照明不会导致荧光标记抗体的光漂白。但是，荧光标记抗体的储备溶液应保存在避光处。处理贴膜时，请使用无粉手套，以避免贴膜上出现虚假外观或指纹。

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