一种用于对秀丽隐杆线虫成人进行光片实时成像的新协议

实时成像研究的美妙之处在于标本是活的，可以随着时间的推移记录细胞分裂和胚胎发育等动态。然而，实时成像研究的挫折在于标本是活的——蠕动、扭曲、逃离视野。此外，它很脆弱，容易受到成像设备本身的热损坏或死亡。

MBL胚胎学课程最近出现了解决这一难题的技术解决方案，这是“MBL协作努力的经典例子”，MBL成像研究专家CarstenWolff说。

“在2021年胚胎学课程期间，我们开始开发一种技术，使我们能够使用光片显微镜对成年秀丽隐杆线虫进行更长时间、高分辨率的成像，”Wolff说。一组课程教职员工与MBL成像仪合作，在2022年课程期间对协议进行了微调，并撰写了这篇论文，该论文于本月发表在《细胞与发育生物学前沿》上。

线虫C.elegans是生物学和生物医学研究中流行的有机体。光片荧光显微镜(LSFM)在捕捉秀丽隐杆线虫以及小鼠和斑马鱼的胚胎过程方面非常成功。但是一旦生物体孵化出来，LSFM就会出现局限性。

在diSPIM光片显微镜上获得的秀丽隐杆线虫PVD​​神经元中树突分支的5小时延时。视频捕捉到了中体部分背侧和腹侧的树突分支。图片来源：JaysonSmith等人，细胞与发育生物学前沿，2022年。

在秀丽隐杆线虫中，困难在于样品安装。由于其光学特性，低熔点琼脂可以很好地用作大型生物的样品培养基，但小蛔虫往往会钻入软琼脂并消失。因此，在此协议之前，成人C.elegans的最长LSFM成像时间为20分钟。新协议将该时间延长到两个多小时，同时避免了样品中的热应力。

“我们描述的创新本质上是两种已知安装方法的组合，”沃尔夫说。

“一种是在样品制备过程中具有粘性的生物聚合物，但一旦将其暴露在紫外线下，它就会变硬并保持样品(在这种情况下为秀丽隐杆线虫)不动。第二部分是塑料管中的安装方法，它允许使用光片显微镜。这种组合允许人们在超过2小时的时间内对成年秀丽隐杆线虫进行实时成像。

“这听起来像是很短的时间，但由于之前固定标本的问题，这是不可能的。此外，由于标本不断的身体运动，LSFM允许从不同角度成像以前是不可能的。”

该团队使用该协议对感觉神经元的树突分支和修剪进行延时成像。他们预计它将能够更好地对其他重要的细胞和发育过程进行实时成像研究，例如生殖干细胞生物学、细胞迁移、细胞分裂和细胞侵袭。该协议可推广到与其他生物体一起使用，几乎不需要修改。