荧光分光光度计用法，荧光分光度计怎么使用荧光分光光度计使用步骤

很多朋友对荧光分光光度计用法，荧光分光度计怎么使用荧光分光光度计使用步骤不是很了解，每日小编刚好整理了这方面的知识，今天就来带大家一探究竟。

荧光分光光度计概述荧光分光光度计是一种用于扫描液体荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等多种物理参数，从多个角度反映分子的成键和结构。

通过测量这些参数，不仅可以进行一般性的定量分析，还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而明确分子结构与功能的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般为190~650nm，发射波长扫描范围为200~800nm。它可用于液体和固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。

荧光分光光度计的分类荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、样品用量少、方法简单、工作曲线线性范围宽等优点，可广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。荧光分光光度计的发展经历了手动荧光分光光度计、自动记录荧光分光光度计和电脑控制荧光分光光度计。

光学分光光度计的三个阶段：荧光分光光度计也可分为两大系列：单光束荧光分光光度计和双光束荧光分光光度计。其他还有低温激光荧光分光光度计、配有寿命和相位分辨率测量的荧光分光光度计等。荧光分光光度计的操作步骤1。开机：接通电源，打开主机开关，点燃(打开)光源，按照指示启动电脑。

2.检测前的准备：根据仪器说明书，20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前对仪器进行预热。3.工作条件的选择：环境温度应为205；相对湿度不大于70%；电源稳定，没有磁场和电场的干扰。根据样品的特性和荧光强度，选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等。).4.基本测定(1)荧光激发光谱测定

设置仪器参数，扫描发射波长，找到最大em，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，得到激发光谱。(2)设置荧光发射光谱测量的仪器参数，扫描激发波长找到maxex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长的函数关系，得到荧光发射光谱。(3)差分光谱测定

设置仪器参数，选择合适的工作模式，测量背景溶液的发射光谱并存储。在一定的工作模式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值与存储的背景值之差，即差光谱。(4)峰面积积分选择合适的工作模式，对样品溶液进行积分运算，得到峰面积积分。(5)荧光强度

选择合适的测量参数，设置ex和em，采用定点读取或扫描方式，可以测量选定波长处的荧光强度。(6)定量测量并配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测量条件下设定ex和em，按由稀到浓的顺序测量标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度-浓度的工作曲线，在不改变仪器参数的情况下，测量未知溶液的荧光强度，然后由工作曲线计算出未知溶液的浓度。

F-2700荧光分光光度计详细操作步骤1、启动电脑(1)打开仪器主机电源(2)按下仪器主机左面板下方的黑色按钮(电源)，观察主机前面板右侧的Xe灯和RUN指示灯依次亮起，均正常显示绿色。(3)双击桌面图标(F-7000用FL Solutions 4.1)，主机自行初始化，扫描界面自动进入。

(4)初始化结束后，必须预热15-20分钟。出现主操作界面(界面右下角出现ready)2、点击扫描界面右侧的“方法”，在“常规”选项中选择“波长扫描”测量模式，在“仪器”选项中设置仪器参数和扫描参数，选择扫描模式：Emissi。开/激发选择数据模式“数据模式”:荧光设置波长扫描范围。

扫描荧光激发光谱：需要设置激发光的起始/终止波长(EXSTART/ENWL)和荧光发射波长(EM WL)。扫描荧光发射光谱：需要设置发射光的起始/终止波长(EMSTART/ENWL)和荧光激发波长(WL除外)。其他选项可从默认值中选择(或根据具体实验要求自行设置)。

3、设置文件存储路径(这一步不需要设置参数，但是可以按照5中的方法保存)(1)点击扫描界面右侧的“样品”(2)样品名称可以自己命名(3)选择“自动文件”自动保存原文件和TXT文本文档数据(4)参数设置完成后点击“确定”:

(2)点击扫描界面右侧的“测量”，窗口中会在线出现扫描谱图5、数据处理和保存(1)选择自动弹出的数据窗口(2)右键-“跟踪”读取并执行寻峰操作(3)文件-“另存为”保存数据6、。

(2)选择“关闭灯，然后关闭监视器窗口？”单击“是”窗口自动关闭，并观察主机前面板右侧的Xe灯指示灯变暗，但运行指示灯仍显示绿色(3)。大约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左面板下的黑色按钮(电源)(目的是只让风扇工作，让Xe灯室散热)。(4)从样品池中取出所有比色杯，清洗干净以备下次使用。(5).

使用荧光分光光度计的注意事项。实验开始前，应提前打开仪器预热，配制所需溶液。对于配制好的溶液，不用时应保存在4冰箱中，放置超过一周的溶液应重新配制。2.实验中使用的样品池是一个四面透光的应时池。取的时候用手指捏住胞体的上角，不能碰到四边。清洁样品池后，用镜面纸轻轻擦拭四周。

3.测试样品时，注意不要将荧光强度范围设置得太高，以免测得的荧光强度超过仪器的上限。4.实验结束后，及时清理桌子，处理废液，清洗放置样品池，将下次使用的溶液放回冰箱，按规定登记实验记录，形成良好的实验习惯。

以上知识分享希望能够帮助到大家！