本人想搞尿激酶的生产，请求帮助,谢谢！ 尿激酶的作用和副作用

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一、本人想搞尿激酶的生产，请求帮助,谢谢！

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尿激酶是从男性尿液中提取的生化药物。广泛用于治疗新鲜血栓闭塞性疾病、肺栓塞、急性脑血栓、脑血管栓塞和视网膜中央静脉血栓等。由于我国人口众多、资源丰富、劳动力成本低廉，粗制尿激酶的生产遍布全国各地。生产的尿激酶粗品中，只有一部分被提炼成优质产品出口，而很多粗品则直接出口，让外商赚取了大量利润。研究纯化尿激酶的技术和方法，提高纯化过程中各工序尿激酶的得率，提高尿激酶产品的高附加值，利用再生资源，出口创汇，造福国家和人民，有具有显着的经济效益和社会效益和意义。 一、 主要原料：尿激酶粗品（硅胶法生产）、甘氨酸（CP）、硫酸（AR）、氢氧化钠（AR）、盐酸（AR）、二氢钠磷酸盐（CP）、磷酸氢二钠、叠氮化钠（AR）、714树脂、CM-S。 二、 试验流程及技术条件（一）分析1、取尿激酶粗品200克（测定比活度为325iu/mgP），悬浮于8倍尿激酶量中。 SM甘氨酸缓冲液中尿激酶浓度为45ooiu/ml，保持低温，搅拌75分钟，静置45分钟，虹吸将上清液与底部沉淀分离。 2. 虹吸上清液后，向沉淀中加入1倍量的甘氨酸缓冲液。同上处理并取上清液。 3.合并两份上清液，低温下缓慢加入SNH:50调节PHlo。学者。1（用于价格确定的抽样）。 （二）714树脂脱色1、按分析液每亿单位的滴定度，在柱上使用1.4kg树脂，使用前用蒸馏水洗涤数个床体积。 2.改变PH10。将分析液上柱，流速控制在1.8~2.oml/cmZmin。收集流出物。装载到柱上后，用床体积的低温蒸馏水洗涤柱。 3.合并柱流出物并调节pH至sNH2SO'10.00.1。 (3)超滤处理1、设定pH为10，脱色液经超滤脱盐，经超滤浓缩至原体积的六分之一左右。 2、向浓缩液中加入低温蒸馏水，稀释至电导率为4.smV（10）。 3. 再次浓缩至六分之一体积。 4、二次精矿加入低温。18M、PH6.8磷酸盐缓冲液和蒸馏水稀释至原体积。两者的比例应使稀释溶液的电导率为4.8 0.lmV（10C 时）。 5. 再次使用SNHZSO 将pH 调节至6.8 0.1。 6. 再次将电导率校准至4.8 。lmV(10)。 （四）CM-S交换胶纯化（低温进行） 1、CM-S预处理：将CM-S用蒸馏水浸泡后，分别用NaOH和HCL处理，然后用0.18M，PH6.8磷酸缓冲液平衡并过滤；将平衡后的CM-S悬浮于含有0.08% NaN:0.18M、pH 6.8的磷酸盐缓冲液中，低温冷藏。 2.CM-S吸附（1）pH 6.8、电导率4.smV的尿酸溶液超滤后，按skg/1亿单位添加平衡CM-S，搅拌两小时，防止起泡，静置一小时。虹吸掉上清液。 (2)将吸附尿激酶的CM-S放在有机玻璃柱上，防止柱内起泡，并使柱表面光滑。 3. 洗涤去除杂质蛋白(1) CM-S 上柱后，用0.3% NaN3, pH 6.8、0.18M 磷酸盐缓冲液洗涤，流速1.8~2。出水滴度低于10oiu/cmZ/cm，光吸收峰低于28onm。04E/有。 (2) 使用1. SMPH6.8 磷酸盐缓冲液洗涤半个床体积。流量保持不变。出水280nm吸收峰应降至0.03以下。 4、尿酸的洗脱(1)洗涤后，用0.08MP、H8.8磷酸氢二钠、0.95M碳酸氢钠缓冲液按一定流速洗脱。4ml/cmZ，测定流出液的效价和280nm吸收峰，合并活性流出液，使混合液浓度在S000in/ml以上。 (2)调节混合液pH至6.~7.0。取样检测后，放入2升塑料瓶中，用干冰快速冷冻，22以下低温保存。

（五）尿酸效价和比活度的测定【UK】 1、试验原理（1）主要试剂和设备恒温水浴锅、刻度闹钟、荧光灯、UK滴度方格纸、牛凝血酶（T）、牛纤溶酶原(PG)、牛纤维蛋白(FG)、英国标准、巴比妥钠、Tri。NaZEDTA、Nael (2)试剂配制T：牛凝血酶40BP(卫生部药品生物制品研究所)，每管加入6.6ml巴比妥钠缓冲液。 PG：牛纤溶酶原22BP（卫生部药品生物制品研究所），每管加入24ml Tris缓冲液。 PG-T：将等体积的PG6.6nil与制备好的6.resistance T混合，放入50%锥形瓶中，扎口备用。 FG：纤维蛋白原片，12sBP（卫生部药品生物制品研究所），每管加入18ml巴比妥钠缓冲液。 (3) 标准UK稀释用巴比妥溶液将标准品(loooiu/管)稀释至60in/ml。 (4)绘制标准曲线取5点位置试管4支，做好标记，分别加入FGO.3电阻； 添加稀释后的UK 标准溶液0。4、0。 3、0。 2、0.lmbu 加入巴比妥溶液0。6、0。 7、0。分别3、0.9次； 分别加入0.4ml PG-T，摇匀，立即放入37恒温水锅中，记录时间； 观察气泡上升，体积减半时记录结束时间； 以单位效价为横坐标，时间为纵坐标，绘制标准曲线。要求至少三个点在一条直线上。 (5) 样品检测 遵循标准曲线，在相同条件、相同试剂下进行样品检测； 分别加入FGO.3ml、巴比妥缓冲液0.gml、PG-TO.4mh 其余步骤同前。 (6) 测量O.D值。样品加酸10倍后稀释，测定O.D值。 （7）计算效价和比活度根据供试品的气泡上升时间，求出标准曲线上相应点的效价，乘以20即为样品的实际效价。 总效价单位效价（iu/mDx总体积（ml）） 比活度平均效价xl.75/0D2。产品收率和比活度的测定进行总效价和分析溶液总和测定比活度，并结果如下： 总效价：2489万单位，比活力：325iu/mgP 纯化后总效价和比活力：1082万单位；比活力：660iu/mgP 纯化收率：41%三、 讨论1、尿激酶通常以两种分子形式存在，即分子量36…和54000，大分子量的尿激酶活性比小分子量的尿激酶强很多，提高了比活性，首先必须除去杂质蛋白，二是去除小分子量尿激酶，分离出来的小分子量尿激酶可以单独回收和纯化。2、尿激酶作为活性物质，在纯化过程中要注意防止失活。我们在研究过程中，首先熟练地掌握了测量尿激酶效价和比活性的步骤，然后不断改变操作条件。通过研究各工序中影响尿激酶得率和比活的因素，逐步找出最佳的工艺条件。 3、CM-S吸附后的母液和滴度大于200iu/ml的部分CM-S洗出液必须通过超滤、盐析回收，可作为粗品原料。用于提取男性尿液中的尿激酶。 pH值为6.5，电导率为20~3OMO-'，细菌总数为1000个/ml。用3N氢氧化钠调节pH至85-9。加入硅藻土吸附沉淀后，过滤硅藻土，用清水搅拌洗涤，旋干后放入交换柱，用氨水冲洗，淋洗液中加入饱和磷酸二钠，调节pH至8.0，加钠氯化物调节电导率至22Mn，通过季乙基多糖凝胶层析柱交联，然后用磷酸盐缓冲液洗脱，流出液与洗脱液合并，加乙酸调节pH至4.2，调节电导率至16~17Mn-' ，通过甲基纤维素层析柱，用氨水洗脱，收集洗脱液，加水透析，然后在离心机中冷冻干燥，即得尿激酶成品。

以上得到的只是尿激酶粗品，还可以用葡萄糖、肝素、人血清白蛋白等进行修饰精制，以增强其生化稳定性，延长其在人体内的作用时间。除采用上述分离方法制备尿激酶外，还可以采用中性蛋白酶降解法制备尿激酶。在国外，DNA重组也用于在大肠杆菌中培养尿激酶原。在提取尿激酶的同时，剩余的尿液还可用于提取人尿白蛋白。尿激酶是一种碱性蛋白酶，无抗原性、毒性或其他副作用。临床可用于肺栓塞、冠心病、脑血栓、心肌梗塞、玻璃体混浊、眼底出血、颅内血肿、静脉栓塞、急（慢性）肾小球肾炎等疾病的治疗。还可用于治疗纤维蛋白病引起的疾病，并可作为辅助抗癌药物。此外，尿激酶还可用于开发保健饮料、太空饮料和化妆品。作为乡镇企业，开发尿激酶产品不仅投资少、效率高、能耗低、原料易得、工艺简单、无毒无害无污染，值得大力推广。

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