组培生根培养基配方？ 组培培养基的配方

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一、组培生根培养基配方？

二、植物组培中的MS培养基的制作需要哪些成分

一、组培生根培养基配方？

(1)MS大量元素母液的制备。一般将大量元素配制成100倍母液，使用时稀释100倍。分别称取NH4NO3 165g kh2po4 17g kno3 190g cacl22h2o 44g mgso47h2o 37g，配制成母液1l。倒入1L试剂瓶中并保存在冰箱中。 (2)MS微量元素母液的制备。一般将微量元素配制成100倍母液。称取ki 0.083g na2moo42h2o 0.025g h3bo3 0.62g cuso45h2o 0.0025g mnso4h2o 1.69g cocl26h2o 0.0025g Znso47h2o 0.86g。配制1L母液，倒入1L试剂瓶中，冰箱保存。由于cuso45h2o和cocl26h2o的称量量很小，如果天平精度达不到万分之一，可先配制调整液。分别称取cuso45h2o 0.05g cocl26h2o 0.05g，制成调整液100ml，再取5ml，即为0.0025g。 (3)配制MS有机母液。一般配制成100倍MS有机母液。称取肌醇10g、盐酸硫胺素(vb1)0.01g、烟酸0.01g、甘氨酸0.05g、盐酸吡哆醇(vb6)0.2g、0.05g配制成1L母液，倒入1L试剂瓶，放入冰箱保存。 (4)MS铁盐母液的制备一般制备成100倍MS铁盐母液。依次称取3.73g edta 二钠、2.78g feso47h2o 制成母液1l，倒入1l 试剂瓶中，冰箱保存。因此，MS母液有5种常量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。激素母液的配制：各种生长素和细胞分裂素必须单独配制，不能混合在一起。生长激素一般需要用少量95%酒精或1当量的naoh溶解，细胞分裂素一般需要用1当量的naoh溶解。溶解盐酸，然后加入蒸馏水至刻度。一般取100mg配成100ml母液。 2、 准备培养基。以制备1l ms培养基为例。按顺序进行以下操作： (1) 首先在烧杯中放入一些蒸馏水。 (2)取上述8种母液各10ml，分别倒入。 (3)一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。 (4)加蒸馏水并用量筒溶解至1L。 (5)按照设计的方案添加各种激素，因为激素的用量很小，而激素对组培植物的生长至关重要。因此，如果可能的话，最好使用微调移液器，以减少误差。 (6)用精密试纸或酸度计调节pH至5.7-5.8。 （如果可能的话，使用酸度计，这样更准确。）可以用1当量的hcl和1当量的naoh来调节溶液的pH值。 1当量HCl的制备：用量筒量取8.3ml，制成100ml溶液。 1当量naoh的制备：称取4g naoh，制成100ml溶液。 （7）称取约5克琼脂粉（优质琼脂粉），倒入上面准备好的溶液中，在电炉上加热至沸腾，直至琼脂粉融化。 (8)稍微冷却后，放入培养容器中。未加盖的培养容器应用封口膜或牛皮纸密封，并用橡皮筋或绳子扎紧。 (9)放入灭菌锅内灭菌，灭菌20分钟左右。 (10)灭菌后，从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上冷却固化。

二、 灭菌

灭菌是组织培养中的重要任务之一。初学者应该了解无菌和无菌的类别。细菌的类别是：任何暴露在空气中或与天然水源接触的物体，至少在其表面，都是细菌。从这个角度来看，未经处理的地方如无菌室、干净的桌子表面、简单煮沸的培养基、我们在处理之前使用的刀剪、我们身体的整个外观以及与外界相连的内表面，比如整个消化道和呼吸道，也就是我们呼出的气体、培养容器等，无论多么干净，都充满了细菌。这里所指的细菌包括细菌、真菌、放线菌、藻类和其他微生物。细菌的特点是：极小，肉眼看不见。它无处不在、无时不在、无处不在。它在自然条件下具有很强的耐力，生活条件简单，繁殖能力极强。当条件合适时，它可以大量繁殖。无菌的范围是：经过高温灼烧或蒸煮一定时间的物体、经过其他物理或化学灭菌方法处理的物体（当然这些方法必须已经被证明是有效的）、物体在高层大气、岩石内部、健康动植物不与外界接触的组织表面和内部，对强酸强碱、化学元素、消毒剂等都是无菌的。从上面可以看出，地球表面的无菌世界比无菌世界小得多。灭菌是指用物理或化学的方法杀灭物体表面和毛孔内的一切微生物或有机体，即杀灭一切有生命的物质。一个相关的概念是消毒，是指杀死、消除或充分抑制某些微生物，使其不再产生有害作用。显然，许多细菌芽孢、霉菌厚垣孢子等在消毒后并不会被完全杀灭，即由于灭菌环境中和物品上仍然存在活的微生物，所以严格灭菌的操作空间（接种、超净工作台、等）和使用的器具以及操作人员的衣服和手不含有任何活的微生物。在这种条件下进行的操作称为无菌操作。植物组织培养对无菌条件的要求非常严格，甚至超过了微生物培养的要求。这是因为培养基营养丰富，一不小心可能会造成杂菌污染。要达到彻底灭菌的目的，必须根据不同的对象采取不同的实用有效的灭菌方法，以保证其在培养过程中不受杂菌的影响，让试管苗正常生长。常用的灭菌方法可分为物理和化学两大类，即：干热（烘烤、燃烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、辐射处理（紫外线、超声波、微波）等物理方法，过滤、清洗、用大量无菌水冲洗等措施；化学方法包括使用氯化汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏尔、漂白粉、次氯酸钠、抗生素和酒精化学品。这些方法和药剂应根据工作中使用的不同材料和目的适当选择。 1、 湿热灭菌培养基。培养基的灭菌过程必须在配制后24小时内完成。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，蒸汽无法逸出，压力不断升高，导致水的沸点不断升高，从而提高锅内温度。在0.1mpa的压力下，锅内温度达到121。在此蒸汽温度下，各种细菌及其耐热性极强的孢子可被快速杀死。注意彻底排除锅内空气，使锅内全部充满水蒸气，这样杀菌才能彻底。高压灭菌的放气方式有多种，但目的都是排除空气，使锅受热均匀，保证灭菌彻底。

常见的方法是：关闭放气阀。通电后，当压力升至0.05mpa时，打开放气阀，将空气排出。压力表指针归零后，关闭放气阀。关闭阀门，再次接通电源，当压力表升至0.1mpa时，开始计时，保持压力在0.1-0.15mpa，持续20分钟。保压时间根据容器的大小而变化，见表。此表中列出的数字是完全灭菌的安全数字。如果容器较大但放置的数量较少，时间也可以减少。

三、 疫苗接种

由于接种过程是开放式的，因此是极易发生污染的时期。这个时期主要是空气中的细菌和工作人员本身造成的。接种室必须严格消毒。接种室内的设备、墙壁、地板等应定期用1%-3%的高锰酸钾溶液清洗。除了使用前用紫外线和甲醛消毒外，使用过程中还可以使用70%的酒精或3%的来苏尔喷雾来沉降空气中的灰尘颗粒。无菌操作可按以下步骤进行： (1)接种前4小时对接种室进行甲醛熏蒸，并打开内部紫外线灯进行灭菌； (2)接种前20分钟，打开超净工作台风扇，(3)接种人员先洗手，在缓冲间换上专用实验服，穿拖鞋； (4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲。然后擦拭工作表面； (5)先用酒精棉球擦拭接种工具，然后用镊子和剪刀从头到尾摩擦，然后反复摩擦尖端，使培养皿干燥； （六）接种时，接种人员双手不得离开工作台，不得说话、移动、咳嗽； （7）疫苗接种后，必须将工作台清洗干净，并用紫外线灯消毒30分钟。如果需要连续接种疫苗，必须每5天进行一次强化消毒。接种是将灭菌的根、茎、叶和其他分离的器官切割或修整成小段或片并置于培养基中的过程。现在将以连贯的方式介绍疫苗接种前和疫苗接种后的程序。无菌接种步骤：（1）将初步洗净、切割好的材料放入烧杯中，带到超净台上，用消毒液消毒，然后用无菌水冲洗，最后沥干水，取出放置。放在已消毒的纱布或滤纸上。 (2)待材料吸干后，一手用镊子，另一只手用剪刀或手术刀将材料适当剪断。例如，将叶子切成0.5厘米见方的小片；将茎切成包含一个节的小段。微茎尖应剥皮至仅含1-2 片幼叶的茎尖大小。接种过程中应经常焚烧接种器材，防止交叉污染。 (3)用烧毁并消毒的器具将切下的外植体插入或放置在培养基上。具体操作过程（以试管为例）是：先解开包装纸，几乎水平地握住试管，将试管口靠近酒精灯的火焰，转动试管口。将管子置于火焰上方，使管口内外燃烧几秒钟。钟。如果用棉塞盖住管口，可先烧管口外侧，取下棉塞，再烧管口内侧。然后用镊子夹起一块切下的外植体，放入试管中，轻轻插入培养基中。如果叶子直接附着在培养基上，则放置1-3片为宜。对于材料的放置方法，除了茎尖和茎段应直立（尖端朝上）放置外，没有统一要求。接种后，将管口放在火焰上几秒钟。还可以使用棉塞。塞好后，用包装纸包好。包装纸的内部也应该过热。

四、栽培

培养是指将培养材料置于培养室（有光照、温度条件、无菌条件下）中生长、分裂、分化形成愈伤组织或进一步分化为再生植株的过程。 1、 培养方法（1）固体培养法是利用琼脂固化培养基培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。这种方法虽然设备简单，易于实施，但养分分布不均匀，生长速度不均匀，常发生褐变和中毒现象。 (2)液体培养法是在液体培养基中培养植物材料而不添加固化剂的方法。由于液体中氧含量较低，通常需要搅拌或振动培养液以保证氧气的供应。培养使用往复摇床或旋转摇床。转速一般为50-100r/min。这种定期浸泡的方法不仅可以使培养基均匀，而且可以保证氧气的供应。

二、植物组培中的MS培养基的制作需要哪些成分

这样，每次使用时，取总量的1/20（50mL）或1/200（5mL），加水稀释，制成培养液。现将配制培养基母液所需的各种物质的量列出来，供配制时使用。大量元素（母液I） mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl22H2O 8 800 MgSO47H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素（母液II）KI 166 H3BO3 1 240 MnSO44H2O 4 460 ZnSO47H2澳1720 Na2MoO42H2O 50 CuSO45H2O 5 CoCl26H2O 5 铁盐（母液III） FeSO47H2O 5 560 Na2-EDTA2H2O 7 460 有机成分（母液IV） IVA 肌醇20 000 IVB 烟酸100 盐酸吡哆醇（维生素B6） ） 100 盐酸硫胺素（维生素B1） 100 甘氨酸400 以上各营养素用量除母液I浓缩20倍外，均为200倍浓缩。上述母液必须分别配成1L储备液。其中，母液I、母液II、母液IV的制备方法为：称取每种母液的几种组分后，用少量蒸馏水充分溶解，然后混合，最后调节体积至1 L。母液III的制备方法为：称取FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别加入450 mL蒸馏水中，加热时不断搅拌使其溶解，然后将两种溶液混合并调节pH至55，最后将体积调整至1L，储存于棕色玻璃瓶中。各种母液配制好后，装入玻璃瓶中，并贴上母液编号、配制倍数、日期等标签，放入冰箱冷藏室保存。 MS培养基还需添加：2,4-二氯苯氧基乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6-BA）等植物生长调节物质，单独配制。进入母液（0?1 mg/mL）。制备方法为：称取这三种物质各10 mg，用少量（1 mL）无水乙醇预溶解2,4-D和NAA，并用少量（1 mL）6-BA与该物质的量。溶解浓度为0.1mol/L的NaOH溶液。溶解过程需要水浴加热，最后定容至100 mL，得到质量浓度为0.1 mg/mL的母液。准备培养液。用量筒或移液管从每种母液中取出所需量：母液I 50 mL，母液II、III、IVA 和IVB 各5 mL。然后取5 mL 2,4-D 和1 mL NAA，与各种母液一起放入烧杯中。

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