质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？ 质粒dna的提取

网上有很多关于质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？的问题，也有很多人解答有关质粒dna的提取的知识，今天每日小编为大家整理了关于这方面的知识，让我们一起来看下吧!

内容导航：

一、质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？

二、质粒DNA的提取溶液1 23 的作用

一、质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？

质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法，现在一般用碱裂解法，试剂盒都有。主要是提取细胞内的环状质粒，一般需要SDS裂解，RNase降解，然后过柱洗脱。过程相对简单。

基因组DNA提取较为复杂，还需要SDS裂解和RND酶降解，但降解时间较长。同时，部分革兰氏阳性菌需要溶菌酶处理，最后用氯仿-苯酚去除蛋白质。这个步骤重复多次。用氯仿除去过量的苯酚后，用乙醇洗涤和干燥，并溶解在TE缓冲液中。整个过程比质粒提取更复杂，耗时更长。

二、质粒DNA的提取溶液1 23 的作用

为了让DNA更好的结合到硅酸盐纤维膜上。用碱裂解法制备质粒DNA时，溶液I、II、III中各成分的作用是1、溶液I:葡萄糖阻止悬浮的大肠杆菌在管底快速沉积；EDTA是Ca2、Mg2等二价金属离子的螯合剂，主要作用是螯合二价金属离子，从而抑制DNA酶的活性。可以加入RNA酶A来消化RNA。2、方案二：这一步是碱处理。

其中NaOH主要用于溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜已经从双层膜结构变成了微胶囊结构。SDS与NaOH结合的目的是增强NaOH的强碱性，SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。这一步需要记住两点：第一，时间不能太长，因为在这样的碱性条件下，基因组DNA片段会慢慢断裂；第二，一定要轻轻搅拌，否则基因组DNA会断裂。

3、溶液III:溶液III用于蛋白质沉淀和中和反应。其中乙酸钾形成PDS是为了用钾离子取代SDS中的钠离子。因为十二烷基硫酸钠遇到钾离子就变成了十二烷基硫酸钾，PDS)，而PDS不溶于水，同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸，钾钠离子置换产生的大量沉淀自然沉淀了大部分蛋白质。2 M乙酸用于中和NaOH。

基因组DNA一旦断裂，只要是50-100 KB大小的片段，就没有办法被PDS共沉淀，所以碱处理时间要短，不允许剧烈振荡，否则最终得到的质粒中总会混入大量的基因组DNA，琼脂糖电泳可以观察到粗的总DNA条带。75%酒精主要用于净盐和抑制脱氧核糖核酸酶；同时，溶液III的强酸性也是为了让DNA更好的与硅酸盐纤维膜结合。

以上就是关于质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同？的知识，后面我们会继续为大家整理关于质粒dna的提取的知识，希望能够帮助到大家！