聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物,有何优缺点? 聚丙烯酰胺凝胶电泳缺点

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一、聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物,有何优缺点?

一、聚丙烯酰胺凝胶作为电泳支持物,有何优缺点?

聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分离蛋白质和寡核苷酸。作用原理聚丙烯酰胺凝胶是一种具有分子筛效应的网络结构。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶和SDS-PAGE；在电泳过程中，非变性聚丙烯酰胺凝胶的蛋白质可以保持完整，并根据蛋白质的分子量、蛋白质的形状和附着电荷的多少而逐渐梯度分离。

根据浙江大学卜哲检测的分离经验，可以发现最容易出现以下问题：1 .pH对整个反应体系的影响非常重要。SDS-PAGE不连续电泳中，用Tris-HCL缓冲体系制备凝胶，浓缩凝胶用pH6.7，pH8.9形成分离凝胶；Tris -甘氨酸缓冲系统用于电泳缓冲液。

在浓缩凝胶中，pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸很少解离，在电场作用下，其游动效率较低。而CL离子很高，两者之间形成一个低电导率的区域，蛋白质分子在两者之间游走。由于电导率与电场强度成反比，在这个区域形成高电压梯度，压迫蛋白质分子聚集在一起，集中到一个狭窄的区域。

当样品进入分离凝胶时，由于凝胶内pH值升高，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接排在氯离子后面。同时，由于分离凝胶孔径的减小，蛋白质分子在电场的作用下，根据其固有的带电性和分子大小进行分离。2.根据样品分离的目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理和还原SDS加烷基化处理。

3.聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺为蛋白质电泳提供了载体，其固化直接关系到电泳的成功，与凝固剂和环境密切相关。4.拖尾主要是样品熔化效果不好或分离胶浓度过高造成的。5.通常，胶水会在30分钟到1小时内凝固.如果凝血过慢，可能是TEMED，APS剂量不足或无效。APS应该可以使用了。TEMED不稳定，容易氧化成黄色。

如果凝血过快，可能是APS和TEMED用多了。这时候胶水太硬容易开裂，电泳的时候容易烫伤。

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