求分子生物学实验讲义 快速混匀器

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一、求分子生物学实验讲义

一、求分子生物学实验讲义

【目的】(1)了解实验的常规仪器、设备和耗材。(2)掌握本实验所用仪器的功能和用法。【实验内容】一、实验室常规仪器设备(一)温度控制系统：1。冰箱：根据保存药品、试剂和各种生物制剂的需要，必须提供不同温度控制等级的冰箱。最常用的冰箱有：4、-20和-80。4适合存放一些溶液、试剂、药品等。

-20适用于一些试剂、药物、酶、血清、制备好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80适用于一些长期低温保存的样品、纯化样品和特殊低温处理的消化液的保存。0-10的冷柜适用于低温下的电泳、层析、透析等实验。

2.液氮罐：某些实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株、纯化样品等需要在超低温环境下快速冷冻和长期保存，所以需要液氮罐(-196)，具有经济、省力、更好保存细胞生物学特性等优点。3.培养箱：37培养箱用于细菌的固体培养和细胞培养。CO2培养箱适用于培养各种细胞，能恒定地提供一定量的CO2(通常为5%)以维持培养液的酸度(pH值)。

37恒温空气摇床可用于培养液体细菌。4.水浴锅：用于保温。25-100水浴摇床可用于分子杂交试验和各种生化酶反应的保温。25-100水浴箱用于常规测试。5.烘箱：主要用来烘干实验用具，有的需要较高的温度，有的需要较低的温度。RNA中使用的实验用具需要在250的烘箱中干燥，一些塑料用具只能在42-45的烘箱中干燥。

(2)水净化装置：随着分子生物学的快速发展，很多实验对水的纯度要求越来越高。1.蒸馏水皿：单一的蒸馏水往往难以满足实验要求。双蒸水和三蒸水混合，很多实验需要去离子水。多次蒸馏水可以去除水中的挥发性杂质，但不能完全去除水中溶解的气体杂质(Mn2、Cu2、Zn2、Fe3、Mo ())。2.离子交换剂：去离子水——用离子交换法制备的水，称为去离子水。

去离子效果好，但不能去除水中的非离子杂质，水中往往含有微量的有机物(树脂等。).13.超纯水：采用蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水作为供水，磁铁与齿轮泵耦合使水循环。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。(3)细菌消毒设备：分子生物学中使用的大部分试剂和实验仪器应严格消毒灭菌。1.蒸汽灭菌器：用于随时对少量物品进行灭菌。

大量的实验用品、试剂、培养基可以大规模、定期消毒。2.紫外线：75%乙醇，0.1%SDS(消毒剂)，部分可耐高压高温消毒，可被紫外线或乙醇和SDS浸泡。紫外线照射使用方便，但杀菌效果与距离有关，臭氧污染安全。用于无菌室、超净工作台、塑料器具的消毒。3.滤膜：其他细菌用于不耐高温高压的试剂。4.煮沸消毒：主要用于急需的金属器械和针头。

(4)测量系统：1。称重系统：(各种秤)台秤、托盘秤、肘杆秤、光电分子秤、精密电子分析天平2。液体体积的测量：精度：量筒、移液管、微量液体提取器：带刻度的试管、烧杯、锥形瓶3。pH测量：pH计：测量溶液中H的直接电位的仪器。

pH试纸：仅适用于粗略估计培养液、苯酚饱和液、缓冲液或其他试剂溶液的PH值。但大部分试剂的配制需要严格的pH值和准确度高(小数点后两位)的酸度计。4.OD值测量：光密度和分光光度计是利用物质在可见光和紫外区的吸收光谱来鉴定物质的性质和含量的仪器。它由光源、单色仪、吸收池、接收器、测量仪器或显示屏组成。

OD值是许多溶液中溶质定量的方便指标之一。溶液中单色光的吸收值可由产生的单色光来确定，并可用于判断核酸溶液的定量和纯度。(5)离心机：离心机技术是研究生物结构和功能不可缺少的物理技术手段。由于沉降系数、浮力和质量的差异，利用强离心力场可以分离、提纯和浓缩各种物质。目前有各种各样的离心机。

可用于0.05毫升以下到几升的样品离心。离心技术应用广泛，包括收集和分离细胞、细胞器和生物大分子。根据转速的不同，可分为以下几种：1。普通离心机：最大转速6000 r/m，最大离心力6000g医用或台式离心机：是最简单、最便宜的离心机，最常用于收集快沉降系数物质，如红细胞、粗沉淀物、酵母菌、细菌等。

低速冷冻离心机：主要用于细胞、细胞核、细胞膜和细菌的沉淀和收集。22.高速离心机：最大转速25000 r/m，最大离心力89000g，分为冷冻和常温两种。多用于手工制备和收集微生物、细胞碎片、细胞、大细胞器、硫酸铵沉淀和免疫沉淀。3.超速离心机：最大转速为9000转/分，最大离心力为694000克.4.台式超速离心机：最大转速为12000转/分，最大离心力为625000克.

(6)洁净工作台：配备紫外线灯、照明灯、酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌设备，提供局部清洁度。原理是鼓风机带动空气通过中低效率过滤器再通过工作台，使实验操作区成为无菌环境。

超净台面按气流方向分几种：侧流：净化后的气流从左侧或右侧穿过台面流向对面，或从上至下或从下至上，都能形成气流屏障，保证台面的无菌性。缺点：在净化气流与外界气体的交界处，由于气体的流向可能会产生负压，使少量未净化的气体混入，造成污染。外流式：气流向操作者方向流动，保证外界空气不能混入。

缺点：在进行有害物质实验时对操作者不利，但可以用有机玻璃盖住上部，使空气向下流出。(7)电泳系统：电泳技术是检测和鉴定各种生物大分子的纯度和含量并描述其特性，甚至分离、纯化、回收和浓缩样品的工具之一。核酸和蛋白质是带电荷的，放在电场中可以移动。电泳装置由电源装置和电泳槽装置两部分组成。

电泳装置：电源需要通过稳流经过稳压器，可以提供稳定的直流电，输出稳定的电压。可用于三种类型：输出电压为0-500v 0-15mA的恒压电泳仪，输出电压为400-1000v的高压稳压电泳仪，输出电压在1000以上的电源装置。电泳槽装置：卧式电泳槽有两种：一般分为微型电泳槽和大型卧式电泳槽；立式电泳槽分为立式平板电泳槽和圆筒形电泳槽装置。

(8) PCR仪：聚合酶链式反应仪，也称DNA热循环仪，基因扩增，将正负DNA链上靶序列两侧的一对寡核苷酸引物结合，从而酶促合成具有百万拷贝靶序列的DNA片段。每个循环包括三个过程：三个不同温度下的DNA变性、引物复性和DNA聚合酶催化的延伸反应。(9)凝胶成像分析系统：电泳后观察和分析含有溴化乙锭(EB)的核酸样品。

(十)干燥设备：31台。真空加热干燥箱：核酸固定在硝酸纤维素膜和尼龙膜上，用于杂交实验。2.电泳凝胶干燥箱：电泳后凝胶脱水干燥的仪器。一般凝胶可以在一些玻璃纸上干燥，干燥后的凝胶容易保存。3.液氮冷冻干燥：适用于活性蛋白质样品的干燥和结晶。4.真空泵：很多实验都需要抽真空。如：乙醇沉淀后核酸样品的干燥，电泳凝胶的干燥等。

(XI)其他1。微波炉：便于某些溶液的快速加热和恒温加热，电泳琼脂糖凝胶的制备和溶解等。2.制冰器：用于制造大部分核酸和蛋白质实验操作所需的低温环境，以减少核酸酶或蛋白酶的水解。3.色谱装置：(色谱分离)是分离多组分混合物的有效物理方法。真空印迹系统，DNA合成/测序仪：这些都是深入研究核酸的必备仪器。

4.磁力搅拌器：多角度旋转混合器和快速振荡混合器：用于混合仪器。5.组织匀浆器：超声波组织和细胞粉碎机，用于分离和纯化样品。6.通风柜：很多溶剂可以逸出有毒气体，必须有柜，放射性测试必须用有机玻璃屏蔽。7.玻璃蒸馏器、电热帽、变压器：用于苯酚等有机溶剂的蒸馏。

8.吸头和Eppendorf管：微管移液器的吸头(移液器吸头)和Eppendorf管(微量离心管)可以清洗、硅化和消毒并重复使用。对于一些要求较高的实验，如RNA提取和保存，应使用新型消毒吸头和Eppendorf管。此外，离心管(1000毫升、500毫升、250毫升、50毫升、7毫升等。)和96孔、24孔、12孔、6孔细胞培养塑料板。

9.小型设备和用具：计时器、滤膜、保鲜膜、安全眼镜用鸭嘴钳、常规玻璃或塑料器皿(包括盘子、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂如饱和酚、巯基乙醇等应使用棕色试剂瓶)、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、耐酸)。

一般来说，苯酚是无色透明的晶体，如粉红色或黄色，这表明它含有苯酚的氧化产物，如醌和二酸。变色的苯酚不能用于实验，因为其中的酚氧化物能破坏核酸的磷酸二酯键，引起DNA链的交联。使用前必须在160-180的温度下再蒸馏，除去能使RNA和DNA断裂交联的污染杂质，得到纯酚。

2.磁力搅拌器：81-2型恒温磁力搅拌器通过导线将导电温度计与两芯插头相连，插入后面的温度计孔中。当温度上升到预设温度时，会自动停止加热(温控搅拌)。主要用于物质的快速搅拌、溶解和混合。例如制备试剂、制备苯酚的水饱和溶液等。

43.蒸馏器：1810B自动双纯水蒸馏器，石英管加热式。该蒸馏器的一次蒸馏和二次蒸馏都有保护装置，使用安全可靠。当冷却水突然中断或缺水时，热继电器会自动切断电源。干簧管继电器控制二次蒸馏瓶中的水位，其高度应基于水位下降时能自动切断电源，以达到自动控制水位的目的。本仪器主要用于制备二次蒸馏水和三次蒸馏水。

4.离心机：TGL-16G台式高速离心机，最高转速20000转/分，主要用于蛋白质沉淀，核酸提取时有机相和水相的分离，PCR检测时的瞬时离心。5.微量液体提取器：主要用于精确测量微量液体的体积，转移核酸水相。6.均质机：5ml，10ml玻璃均质机。主要用于破碎组织细胞。7.凝胶成像分析系统主要用于核酸样品的琼脂糖凝胶和PCR电泳结果的紫外观察和拍照。

8.PCR仪：PTC-200基因扩增仪用于体外扩增核酸9。蒸汽灭菌器：对实验试剂、器具、用具有电加热和电炉加热两种灭菌去污方法。10.超净工作台：JJT-1300侧流式超净工作台。原理：吸入的空气经过一级和二级过滤盘(无纺布过滤器)，再由风机通过高级过滤器(超细玻璃纤维滤纸制成)，形成洁净空气。

主要是在局部空气中创造一个洁净的空气环境，使工作区域内的悬浮颗粒和微生物保持在最低限度。本表的工作压力为垂直层流压力，不要在出风面和工作位置放置不必要的物品，以免阻碍空气的正常流动，影响清洁度。桌面上的孔作为通风孔，避免使用过程中液体或其他物品泄漏到空气中，不影响内部部件。风速是可调的。使用方法：用75%乙醇消毒2-3次，放好实验用品。

插上电源，紫外线消毒30分钟，启动风扇5米后关灯，关灯10分钟后打开照明灯，即可使用。11.电泳系统：电泳仪：HV-3000型三恒多用电泳仪(恒压、恒流、恒功率)电泳槽：卧式。12.微波炉：主要用于琼脂糖的快速溶解。

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