药物分析：常用定量分析法与应用——理化法 对二甲氨基苯甲醛用途

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一、药物分析：常用定量分析法与应用——理化法

一、药物分析：常用定量分析法与应用——理化法

(1)重量法：根据样品中分离出的元素或化合物的重量测定各组分的含量。根据被测组分分离方法的不同，可分为萃取法、挥发法和沉淀法。 1、萃取法是利用合适的溶剂从样品中萃取出某种成分，然后蒸发溶剂进行测定。例如，胰酶中的脂肪含量是通过用乙醚萃取然后蒸发乙醚来测量的。残余物在105干燥2小时，称重并计算。 2、挥发法是利用被测组分的挥发性或将其转化为挥发性物质进行含量测定的方法。 “灼烧残渣”是直接挥发的特殊方法； “干燥失重”是一种间接挥发法。 3、沉淀法是利用沉淀反应，将被测组分转化为不溶性物质，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后过滤、洗涤、干燥或灼烧，最后称重并计算其含量的方法。其测定是基于样品中某些成分与标准溶液之间发生定量的酸碱中和、氧化还原或络合反应。例如，胰蛋白酶的淀粉酶测量使用氧化还原反应，使用淀粉作为底物。经淀粉酶水解后，产生还原糖。在碱性溶液中，还原糖将费林试剂中的cuz+ 还原为cu+。通过在酸性溶液中与ki 反应沉淀过量的cu+ 碘，然后用硫代硫酸钠滴定沉淀的碘以估算糖含量，然后校准淀粉酶的效力。另一个例子是使用电位滴定法测量盐酸精氨酸的含量。 (3)比色法：样品与显色剂发生显色反应，根据显色反应的强度测定含量。例如，测定蛋白质含量时，可利用蛋白质与缩二脲试剂的显色反应来定量。硫酸软骨素的含量也使用比色法测量，如下详述。该菌株是从猪喉骨、鼻骨、气管等软骨组织中提取的酸性粘多糖。以干品计算，己糖胺含量不得低于24.0%，以葡萄糖胺计。本品的含量采用埃尔森-摩根比色法测定。基本原理是样品先用盐酸水解生成己糖胺，然后在碱性条件下与乙酰丙酮反应生成显色物质，再与对二甲氨基苯甲醛反应。显红色，以盐酸氨基葡萄糖为对照品，用比色法测定。对照品溶液的制备：精密称取已于105干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0.1g，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精确量取10ml，置于100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1ml含盐酸氨基葡萄糖0.1mg。供试品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置50ml量瓶中，加6mol/l盐酸使溶解，稀释至刻度，摇匀；准确量取5rll 并将其放入5oml 量瓶中。旋紧塞子，置于水浴中水解2小时，取出放冷，用氢氧化钠溶液（15）中和至中性，加水至刻度，摇匀，滤干滤纸，弃去初始滤液，保留继续滤液。空闲的。

测定方法：精密量取对照品与供试品溶液各1ml，各2份，置4支具塞试管中，加水至5ml，各1ml。另取另一具塞试管，加水5ml作为空白，每1ml丙酮试液中加入乙酰基，摇匀，置于水浴中（塞紧1ml），加热正好25分钟，取出，迅速用冰水冷却，加入3ml无醛乙醇，在6o水浴中孵育10分钟，然后加入P2甲氨基苯甲醛试液1ml，剧烈摇匀，继续在60中孵育C水浴1小时。立即用冷水冷却至室温，用分光光度法在波长525 nm处测定对照品溶液和供试品溶液的值。吸光度计算为两份的平均值：（计算公式）其中为供试品溶液的平均吸光度，s 为对照品溶液的平均吸光度，ws 为对照品溶液的平均吸光度，ws 为平均值对照品溶液的吸收。 lml中所含氨基葡萄糖盐酸盐的量（mg），w为测试样品的重量（mg），0.8309为氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖的分子量之比。该方法特异性强、操作简便、结果稳定。值得注意的是，实验中使用的乙醇必须是无醛乙醇。否则会影响测量结果的准确性。 (4)紫外分光光度法如果样品或转换产物在某一波长处有最大吸收，且在一定浓度范围内，其浓度与吸光度成正比，则可进行定量测定。例如，蛋白质在280nm附近有最大吸收，胰蛋白酶与底物N-乙酰-L酪氨酸乙酯相互作用的产物在237nm处有最大吸收，可以根据其吸光度进行定量。 （5）高效液相色谱法高效液相色谱法（hplc）方法种类较多，应用广泛。生化药物中常用的方法总结如下。 1.反相高效液相色谱(rp-hplc)采用(c4、c8、c18)烷基硅烷键合相作为柱填料，甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈和缓冲液组成的溶液以液体为流动相，采用紫外、荧光或电化学检测器作为检测方法。该色谱系统广泛应用于生化药物（如多肽、氨基酸、蛋白质、多糖等）的定量分析。例如：采用rp-hplc方法测定leucomax的含量。该菌株是一种基因工程药物。其活性成分为重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hugmcsf），是调节造血和白细胞功能所必需的蛋白质。含量测定方法如下。磷酸盐缓冲液的配制：称取Na2HPO 43.55g，加水400ml，溶解并用稀磷酸调节pH至7.0，加水至500ml，摇匀。供试品及对照晶体溶液的制备：精密称取供试品或对照品适量，用上述磷酸盐缓冲液配制成300g/ml溶液。

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