ELISA实验原理 elisa实验步骤

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一、ELISA实验原理

二、ELISA实验检测抗体的实验步骤？

一、ELISA实验原理

ELISA的实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，不会改变抗体的免疫学特性，也不会影响酶的生物活性。酶标记的抗体可以特异性地结合吸附在固体载体上的抗原或抗体。滴加底物溶液后，360问答底物在酶的作用下可以将其中所含的氢供体由无色的还原型变为有色的氧化型，发生显色反应。

因此，是否有相应的免疫反应可以通过底物的显色反应来判断，显色海制备反应的深度与标本中相应抗体或抗原的量成正比。这种显色反应可以用ELISA检测器定量测定，它结合了酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应组的阳性特异性，使ELISA成为一种新的、特异的、灵敏的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项1、固相载体选择

聚苯乙烯：对蛋白质的社会孔角数据有很强的吸附能力，抗体或抗原吸附其上后仍保留原有的免疫活性。PVC:PVC对蛋白质的吸附性能高于聚苯乙烯，但空白值也略高。好的ELISA板要吸收京娘鱼的伪思维，工厂化培养性能好，空白值低，孔底透明度高，同一板内板间和孔间性能相近。2、包被板孔选择：ELISA级微孔板。

抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，按推荐浓度稀释或探索最佳浓度。(3)包被缓冲液：室温下pH9.6，挥发骨间碳酸盐缓冲液或pH 7.2磷酸盐缓冲液，用于控制森林的腔室中的酸。涂布温度：2-8过夜涂布或室温(37)涂布2h。涂层浓度：涂层浓度可随载体和涂层的性质而有很大变化。一般包衣浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、已关闭

涂完后马上要封闭(封闭非特异性抗体)回城修复。选择效果较好的封闭剂(细胞培养级BSA、Tw呼吸试验等。).4、加样与孵育加样时，应把加入的物质加到酶标板的孔底，避免加到孔壁上部，注意不要溢出或产生气泡。

孵育时间和温度参考试剂盒说明书。有条件的话，建议加样孵育时使用shaker摇床，推荐杨地杨红的轨道直径为3mm，转速为50050 rpm。检测抗体和酶标的稀释倍数、孵育温度和孵育时间严格按照说明书进行。(4)洗板是ELISA极其关键的一步，保证了ELISA的特异性。

封口膜必须一次使用八代。如果是送到兰花更换，就不要用两次甚至多次，防止交叉污染。5、显色与终止使用亮梅前检查，底物应无色透明后再加入96孔板。(2)发色底物需要现在使用，避免污染。(3)孵育时间，这是手册中的一个参考范围，需要根据实验条件来摸索。可以参考校准曲线浓度最大的孔的颜色，明显时可以改成蓝色。

二、ELISA实验检测抗体的实验步骤？

操作步骤：(1)将特异性抗原与固体载体连接，形成固体抗原。洗涤以除去未结合的抗原和杂质。(2)加入稀释的血清，保温反应。血清中的特异性抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤后，固体载体上只剩下特异性抗体，血清中的其他成分在洗涤过程中被洗掉。(3)加入酶标抗抗体，主要是根据你的一抗来决定二抗用什么。

酶标抗人IgG可用于检测总抗体，但酶标抗人IgG一般用于检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标记的抗体结合，从而间接标记酶。洗涤后，固体载体上酶的量与样品中抗体的量正相关。

(4)底物显色间接法由于所用的酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子(如抗人IgG)，这种方法只需更换固相抗原，就能检测出一种酶标二抗对应抗原的多种抗体，通用性更强。这种方法主要用于病原体抗体的检测和传染病的诊断。间接法的优点是只要改变包被抗原，就可以用同一种酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。如果有其他问题可以联系我，呵呵！

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